第201章 35%（感謝牛津面的盟主！）
第201章 35%（感謝牛津面的盟主！）
學校的實驗室條件沒那麼好。
空調老化，地方不大，房間裡人也有點多。
條件算是艱苦吧，大家卻一點不覺得累，一個個熱血沸騰的，就想著快點把這個項目做出來。
陳浩上次這麼有動力的時候還是在大二夏天，跟老江去參加網吧舉辦的CS1.6網吧賽0
時過境遷。
曾經的M4網癮少年，現在已經變成使用移液槍的高手了。
蔡卓群將無酶水吸出，打入離心管底部，反覆吹打。
王曉晴觀察片刻後說：「測一下吧。」
蔡卓群點點頭，拔下槍頭，拿著樣本走到NanoDrop分光光度計前。
用移液槍吸取了1微升樣本，滴在檢測基座上，放下檢測臂，在連接的舊桌上型電腦上點擊了測量。
屏幕上很快跳出了數據。
陸曉林停下了手裡的活，轉頭問道：「多少？」
蔡卓群：「濃度12ng/ul，A260/280比值是1.32，A260/230比值是0.7。
C
王曉晴盯著屏幕看了一會兒，有點無奈：「這已經是第四批廢樣了————」
項目的難度遠遠超出除江河外所有人的預期。
雖然之前江河用加入DMSO的方法，解決了PCR擴增階段引物二聚體的問題。
但解決了一個問題，接下來還會出現更多的問題——
現在的瓶頸，卡在了提取上。
miRNA在血液中的含量極低，且非常容易被血液中的RNA酶降解。
純度不夠。
A260/280的比值正常應該在1.8到2.0之間，低於1.8就意味著樣本中存在大量的蛋白質污染。
而A260/230比值只有0.7，更是說明裡面混了大量的酚類物質或者鹽離子。
用這種樣本去做下一步的逆轉錄，雜質會讓逆轉錄酶失活，後面的PCR擴增根本跑不出真實數據。
蔡卓群試圖尋找原因：「王教授，是不是氯仿的用量不夠？我們在取上清液的時候，可能還是帶入了一些中間層的蛋白質。」
王曉晴搖搖頭：「上一批我們已經把氯仿的比例提高了百分之二十，離心時間也延長了五分鐘，純度是稍微好了一點，但是濃度直接掉到了5ng/ul以下。」
陸曉林在一旁分析：「血清里全是蛋白，游離的核酸少，TrizoI提取法，用在血清上，天生就有缺陷。」
實驗室眾人，陷入沉默。
其實在後世，有專門針對血清的柱提法商業試劑盒，傻瓜式操作，半個小時就能得到高純度的miRNA。
但在08年，專門針對液體活檢的試劑盒在國內根本買不到，就算買到了技術也還遠未成熟，所以只能用最基礎的化學試劑，手工一步步去摳。
蔡卓群問：「王教授，有什麼辦法沒？」
王曉晴：「別問我，江河呢？江河去哪兒了？」
陳浩舉手：「老江說有點事來著，馬上回來。」
王曉晴：「那大家先停一下吧，休息十分鐘。」
曉晴教授現在也是學聰明了。
自己苦哈哈研究半天，不如江河回來一句話直接解決。
與其浪費腦細胞，還不如休息休息，保存體力————
眾人出去休息時。
易向晚和顧亦舟去給大家買水。
在路上，易向晚罕見地沒有開玩笑，略顯憂愁的說道：「師兄，你說咱們這項目，到底能成嗎？」
顧亦舟看了他一眼：「怎麼了？不想幹了？」
「哎呀，那肯定不是啊，只是————我在想一件事嗷，退一萬步講，就算我們今天把提取純度的問題解決了，就算接下來的逆轉錄、PCR體系全部都解決了，然後呢？」
顧亦舟皺著眉頭。
易向晚接著說：「我們該如何驗證呢？既然是胰腺癌早篩，那到了最後，驗證模型是否有效的話，我們需要真正的患者樣本吧？」
「而且，我們需要的是【看起來完全健康，但實際上剛患上極早期胰腺癌的患者的血】。」
其實這個問題，幾個核心組員心裡都有想過。
只是大家都在悶頭幹活，誰也沒有捅破。
因為胰腺癌的隱蔽性極強。
當患者因為腹痛、黃疸去醫院就診時，往往已經是中晚期了。
極早期胰腺癌，患者自身沒有任何症狀，常規體檢也查不出來。
所以，想要拿到這種樣本，唯一的途徑就是依靠完善的血清生物樣本庫。
就是醫院長期保存大量體檢人群的血清，幾年後，當其中某些人被確診為胰腺癌時，研究人員再把他們幾年前還是健康狀態時的血清找出來，用來測試江河的早篩模型，看看能不能在幾年前的血液里發現異常的miRNA升高。
但現實是，08年的中國，沒有醫院擁有如此完善的高質量血清生物樣本庫。
協和也沒有。
「所以，如果找不到驗證數據，驗證數據就沒意義————」
「喝什麼？」顧亦舟打斷了他。
「啊？哦，呃，可樂吧，可樂就好。」
易向晚接過冰可樂，在自己的脖子上滾了一圈，好涼。
而後他說道：「師兄，我說這個不是打擊老大的意思，我的意思是————」
「行了，別解釋了，想那麼多幹嘛？這些問題是老大需要考慮的，我們現在的任務是把提取這關過了，別到了最後，老大從歐洲、從挪威、從美國把樣本找來了，結果咱們連RNA都提不出來，那才叫丟人。
1
「靠，也是啊！確實有點想太多了————」
兩個人帶著水回到實驗室。
發現江河已經回來了，正站在NanoDrop的屏幕前。
而且王教授正在乖巧地匯報情況：「純度提不上去，TrizoI的局限性，血清里的蛋白含量遠超組織，吸取上清液的時候，不可避免地會帶入雜質，如果要避免帶入雜質，就只能吸取最表層的少量液體，但那樣RNA的濃度又達不到下游PCR的要求，咋辦？」
江河淡然道：「不早跟你們說過了？加糖原。」
實驗室里的人都愣了一下。
老組員雖然聽過江河講這個事情，但是大家都不知道具體該怎麼執行啊————
「噢，怪我，講的不夠細。」
江河隨後解釋道：「在加入異丙醇沉澱之前，往水相里加入5微升濃度為5mg/ml的糖原作為共沉澱劑，不僅能作為載體幫助極微量的RNA聚集沉澱，還能讓最後形成的沉澱團塊變得肉眼可見，方便後續洗滌，減少丟失。」
陸曉林思考了一下，提出了疑問：「可是這解決不了雜質的問題啊，只要我們用移液槍吸水相，還是會吸到蛋白。」
江河回答：「所以，洗兩遍，雙重氯仿抽提，第一次加氯仿離心後，吸取上清液，移入新的離心管，然後，往吸出的這部分上清液里，再加一次等體積的氯仿，劇烈震盪，進行第二次離心，簡單來說，犧牲第一次的取液量來換取純度，然後再通過加入糖原共沉澱，把濃度拉回來。」
這下大家聽懂了。
王曉晴在心裡給自己點了個贊。
放棄思考，果然是正確的。
一聽江河的就完事了！
一嘖，要是每個項目都能有一個江河就好了，就不用天天在實驗室熬掉頭髮。
曉晴教授馬上就要步楊煦的後塵了。
楊煦也是，自從跟江河合作上了手術台之後，就很想每次上手術台都把江河帶上了——
教授們需要嚴肅反思這種過於依賴江河的行為。
實驗在新方案下，再次開始。
高速冷凍離心機，蓋上蓋子，設定參數：4攝氏度，12000g，15分鐘。
離心機運轉的時候很吵。
江河隨便找了個凳子坐下，繼續往後推演接下來的研究。
剛才他離席出去打了個電話，聊的就是血清的事情。
「放心吧，江河，我會走歐洲高規格的聯合醫學科研通道，通過跨國乾冰冷鏈把極早期患者的血清特批空運過來————」
說出這話的顧老師，真是令人安心啊。
實驗室里其他人都有些緊張，大家都在等待這15分鐘後的結果。
易向晚看著江河的背影，濃濃的安全感瞬間湧上來了。
仿佛只要他在，所有的問題就只是簡單的步驟調整——————
想必血清的問題，老大也一定能搞定的。
確實是自己多慮了啊。
但易向晚不知道的是。
江河此刻的平靜，到底是經歷了什麼才換回來的。
那時的醫療技術比08年先進得多。
但對於江河來說，卻是一個毫無意義的時代。
她走得很快，胰腺癌晚期，從發現到離世，痛苦而短促。
妻子去世後的那三年，他幾乎住在了實驗室里。
瘋了一樣地查閱文獻，去研究胰腺癌的早期標誌物。
總是在想，如果能早一點發現，她是不是就不會死？
近乎病態的偏執，支撐著他最後一口氣。
當時江河也面對了這個提取純度的問題。
那時的試劑盒雖然好用，但成本極高。
而且對於極其微量的標誌物提取依然不夠穩定。
為了找到一套穩妥且成本可控的提取體系，他獨自摸索。
加多少濃度的糖原？離心機的溫度差一攝氏度會怎樣？轉速提高500g會帶來多少剪切力的破壞？
前世的他，沒有人指導。
在一次次的數據報錯中，在一管管作廢的樣本中，在一整夜一整夜的失眠中，凝聚出了這套完美的方案。
一萬次失敗，才換來一次穩定的讀數。
那時的實驗室比現在寬，設備比現在先進，但那是他這輩子待過最冷的地方。
所以現在。
秋日正好。
只需要把曾經刻在骨子裡的正確答案拿出來，就像在數學題上，毫不猶豫地寫下那個唯一解。
「滴一」
離心機停止轉動。
蔡卓群立刻上前，小心翼翼，取出離心管。
管底，出現了一個白色沉澱。
加入糖原後，成功析出RNA複合體。
加入無酶水溶解。
移液槍吸取1微升。
滴入NanoDrop基座。
測量！
新的數據出現。
濃度：14ng/ul。
A260/280：1.92。
A260/230：2.01。
極其完美的數據！
雖然濃度只有十幾，但這已經是普通提取法的數倍，最關鍵的是，它的純度極高，足夠支撐下游的逆轉錄PCR。
王曉晴久久沒有說話。
她知道在現有的條件下，手工把血清RNA提取做到這種純度和濃度，意味著什麼。
這意味著極致的原理掌控和參數理解。
這意味著，江河隨口說出的幾個步驟改動，直接跨越了當前業內好幾年的摸索時間。
她轉過頭，看向江河。
在這個二十一歲的學生身上，她甚至看到了一種令人敬畏的科研壓迫感。
作為一個無神論者，江河身上有仙家的傳說，現在是不得不信了————
陳浩最淡定。
他被江河裝過最多的逼，自適應拉滿。
於是淡定道：「老江，純度過關了。」
江河點頭，在實驗記錄本上邊寫邊說：「提取這一步的標準作業程序就按這個定下來，接下來的所有血清樣本，全部按照雙重氯仿加糖原的流程提。」
江河不忘誇了一句：「進度我很滿意，各位，辛苦了，繼續吧，我得去一趟醫院，接下來的工作交給你們。」
眾人齊聲應道：「收到！」
江河洗完手，雙手揣兜，離開實驗室，帥得沒話說。
在他腦海里，其實有一個非常明確的進度條。
【miRNA胰腺癌早篩項目進度：25%——————】
提取流程攻克，再漲十個百分點。
【miRNA胰腺癌早篩項目進度：35%————】
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學校的實驗室條件沒那麼好。
空調老化，地方不大，房間裡人也有點多。
條件算是艱苦吧，大家卻一點不覺得累，一個個熱血沸騰的，就想著快點把這個項目做出來。
陳浩上次這麼有動力的時候還是在大二夏天，跟老江去參加網吧舉辦的CS1.6網吧賽0
時過境遷。
曾經的M4網癮少年，現在已經變成使用移液槍的高手了。
蔡卓群將無酶水吸出，打入離心管底部，反覆吹打。
王曉晴觀察片刻後說：「測一下吧。」
蔡卓群點點頭，拔下槍頭，拿著樣本走到NanoDrop分光光度計前。
用移液槍吸取了1微升樣本，滴在檢測基座上，放下檢測臂，在連接的舊桌上型電腦上點擊了測量。
屏幕上很快跳出了數據。
陸曉林停下了手裡的活，轉頭問道：「多少？」
蔡卓群：「濃度12ng/ul，A260/280比值是1.32，A260/230比值是0.7。
C
王曉晴盯著屏幕看了一會兒，有點無奈：「這已經是第四批廢樣了————」
項目的難度遠遠超出除江河外所有人的預期。
雖然之前江河用加入DMSO的方法，解決了PCR擴增階段引物二聚體的問題。
但解決了一個問題，接下來還會出現更多的問題——
現在的瓶頸，卡在了提取上。
miRNA在血液中的含量極低，且非常容易被血液中的RNA酶降解。
純度不夠。
A260/280的比值正常應該在1.8到2.0之間，低於1.8就意味著樣本中存在大量的蛋白質污染。
而A260/230比值只有0.7，更是說明裡面混了大量的酚類物質或者鹽離子。
用這種樣本去做下一步的逆轉錄，雜質會讓逆轉錄酶失活，後面的PCR擴增根本跑不出真實數據。
蔡卓群試圖尋找原因：「王教授，是不是氯仿的用量不夠？我們在取上清液的時候，可能還是帶入了一些中間層的蛋白質。」
王曉晴搖搖頭：「上一批我們已經把氯仿的比例提高了百分之二十，離心時間也延長了五分鐘，純度是稍微好了一點，但是濃度直接掉到了5ng/ul以下。」
陸曉林在一旁分析：「血清里全是蛋白，游離的核酸少，TrizoI提取法，用在血清上，天生就有缺陷。」
實驗室眾人，陷入沉默。
其實在後世，有專門針對血清的柱提法商業試劑盒，傻瓜式操作，半個小時就能得到高純度的miRNA。
但在08年，專門針對液體活檢的試劑盒在國內根本買不到，就算買到了技術也還遠未成熟，所以只能用最基礎的化學試劑，手工一步步去摳。
蔡卓群問：「王教授，有什麼辦法沒？」
王曉晴：「別問我，江河呢？江河去哪兒了？」
陳浩舉手：「老江說有點事來著，馬上回來。」
王曉晴：「那大家先停一下吧，休息十分鐘。」
曉晴教授現在也是學聰明了。
自己苦哈哈研究半天，不如江河回來一句話直接解決。
與其浪費腦細胞，還不如休息休息，保存體力————
眾人出去休息時。
易向晚和顧亦舟去給大家買水。
在路上，易向晚罕見地沒有開玩笑，略顯憂愁的說道：「師兄，你說咱們這項目，到底能成嗎？」
顧亦舟看了他一眼：「怎麼了？不想幹了？」
「哎呀，那肯定不是啊，只是————我在想一件事嗷，退一萬步講，就算我們今天把提取純度的問題解決了，就算接下來的逆轉錄、PCR體系全部都解決了，然後呢？」
顧亦舟皺著眉頭。
易向晚接著說：「我們該如何驗證呢？既然是胰腺癌早篩，那到了最後，驗證模型是否有效的話，我們需要真正的患者樣本吧？」
「而且，我們需要的是【看起來完全健康，但實際上剛患上極早期胰腺癌的患者的血】。」
其實這個問題，幾個核心組員心裡都有想過。
只是大家都在悶頭幹活，誰也沒有捅破。
因為胰腺癌的隱蔽性極強。
當患者因為腹痛、黃疸去醫院就診時，往往已經是中晚期了。
極早期胰腺癌，患者自身沒有任何症狀，常規體檢也查不出來。
所以，想要拿到這種樣本，唯一的途徑就是依靠完善的血清生物樣本庫。
就是醫院長期保存大量體檢人群的血清，幾年後，當其中某些人被確診為胰腺癌時，研究人員再把他們幾年前還是健康狀態時的血清找出來，用來測試江河的早篩模型，看看能不能在幾年前的血液里發現異常的miRNA升高。
但現實是，08年的中國，沒有醫院擁有如此完善的高質量血清生物樣本庫。
協和也沒有。
「所以，如果找不到驗證數據，驗證數據就沒意義————」
「喝什麼？」顧亦舟打斷了他。
「啊？哦，呃，可樂吧，可樂就好。」
易向晚接過冰可樂，在自己的脖子上滾了一圈，好涼。
而後他說道：「師兄，我說這個不是打擊老大的意思，我的意思是————」
「行了，別解釋了，想那麼多幹嘛？這些問題是老大需要考慮的，我們現在的任務是把提取這關過了，別到了最後，老大從歐洲、從挪威、從美國把樣本找來了，結果咱們連RNA都提不出來，那才叫丟人。
1
「靠，也是啊！確實有點想太多了————」
兩個人帶著水回到實驗室。
發現江河已經回來了，正站在NanoDrop的屏幕前。
而且王教授正在乖巧地匯報情況：「純度提不上去，TrizoI的局限性，血清里的蛋白含量遠超組織，吸取上清液的時候，不可避免地會帶入雜質，如果要避免帶入雜質，就只能吸取最表層的少量液體，但那樣RNA的濃度又達不到下游PCR的要求，咋辦？」
江河淡然道：「不早跟你們說過了？加糖原。」
實驗室里的人都愣了一下。
老組員雖然聽過江河講這個事情，但是大家都不知道具體該怎麼執行啊————
「噢，怪我，講的不夠細。」
江河隨後解釋道：「在加入異丙醇沉澱之前，往水相里加入5微升濃度為5mg/ml的糖原作為共沉澱劑，不僅能作為載體幫助極微量的RNA聚集沉澱，還能讓最後形成的沉澱團塊變得肉眼可見，方便後續洗滌，減少丟失。」
陸曉林思考了一下，提出了疑問：「可是這解決不了雜質的問題啊，只要我們用移液槍吸水相，還是會吸到蛋白。」
江河回答：「所以，洗兩遍，雙重氯仿抽提，第一次加氯仿離心後，吸取上清液，移入新的離心管，然後，往吸出的這部分上清液里，再加一次等體積的氯仿，劇烈震盪，進行第二次離心，簡單來說，犧牲第一次的取液量來換取純度，然後再通過加入糖原共沉澱，把濃度拉回來。」
這下大家聽懂了。
王曉晴在心裡給自己點了個贊。
放棄思考，果然是正確的。
一聽江河的就完事了！
一嘖，要是每個項目都能有一個江河就好了，就不用天天在實驗室熬掉頭髮。
曉晴教授馬上就要步楊煦的後塵了。
楊煦也是，自從跟江河合作上了手術台之後，就很想每次上手術台都把江河帶上了——
教授們需要嚴肅反思這種過於依賴江河的行為。
實驗在新方案下，再次開始。
高速冷凍離心機，蓋上蓋子，設定參數：4攝氏度，12000g，15分鐘。
離心機運轉的時候很吵。
江河隨便找了個凳子坐下，繼續往後推演接下來的研究。
剛才他離席出去打了個電話，聊的就是血清的事情。
「放心吧，江河，我會走歐洲高規格的聯合醫學科研通道，通過跨國乾冰冷鏈把極早期患者的血清特批空運過來————」
說出這話的顧老師，真是令人安心啊。
實驗室里其他人都有些緊張，大家都在等待這15分鐘後的結果。
易向晚看著江河的背影，濃濃的安全感瞬間湧上來了。
仿佛只要他在，所有的問題就只是簡單的步驟調整——————
想必血清的問題，老大也一定能搞定的。
確實是自己多慮了啊。
但易向晚不知道的是。
江河此刻的平靜，到底是經歷了什麼才換回來的。
那時的醫療技術比08年先進得多。
但對於江河來說，卻是一個毫無意義的時代。
她走得很快，胰腺癌晚期，從發現到離世，痛苦而短促。
妻子去世後的那三年，他幾乎住在了實驗室里。
瘋了一樣地查閱文獻，去研究胰腺癌的早期標誌物。
總是在想，如果能早一點發現，她是不是就不會死？
近乎病態的偏執，支撐著他最後一口氣。
當時江河也面對了這個提取純度的問題。
那時的試劑盒雖然好用，但成本極高。
而且對於極其微量的標誌物提取依然不夠穩定。
為了找到一套穩妥且成本可控的提取體系，他獨自摸索。
加多少濃度的糖原？離心機的溫度差一攝氏度會怎樣？轉速提高500g會帶來多少剪切力的破壞？
前世的他，沒有人指導。
在一次次的數據報錯中，在一管管作廢的樣本中，在一整夜一整夜的失眠中，凝聚出了這套完美的方案。
一萬次失敗，才換來一次穩定的讀數。
那時的實驗室比現在寬，設備比現在先進，但那是他這輩子待過最冷的地方。
所以現在。
秋日正好。
只需要把曾經刻在骨子裡的正確答案拿出來，就像在數學題上，毫不猶豫地寫下那個唯一解。
「滴一」
離心機停止轉動。
蔡卓群立刻上前，小心翼翼，取出離心管。
管底，出現了一個白色沉澱。
加入糖原後，成功析出RNA複合體。
加入無酶水溶解。
移液槍吸取1微升。
滴入NanoDrop基座。
測量！
新的數據出現。
濃度：14ng/ul。
A260/280：1.92。
A260/230：2.01。
極其完美的數據！
雖然濃度只有十幾，但這已經是普通提取法的數倍，最關鍵的是，它的純度極高，足夠支撐下游的逆轉錄PCR。
王曉晴久久沒有說話。
她知道在現有的條件下，手工把血清RNA提取做到這種純度和濃度，意味著什麼。
這意味著極致的原理掌控和參數理解。
這意味著，江河隨口說出的幾個步驟改動，直接跨越了當前業內好幾年的摸索時間。
她轉過頭，看向江河。
在這個二十一歲的學生身上，她甚至看到了一種令人敬畏的科研壓迫感。
作為一個無神論者，江河身上有仙家的傳說，現在是不得不信了————
陳浩最淡定。
他被江河裝過最多的逼，自適應拉滿。
於是淡定道：「老江，純度過關了。」
江河點頭，在實驗記錄本上邊寫邊說：「提取這一步的標準作業程序就按這個定下來，接下來的所有血清樣本，全部按照雙重氯仿加糖原的流程提。」
江河不忘誇了一句：「進度我很滿意，各位，辛苦了，繼續吧，我得去一趟醫院，接下來的工作交給你們。」
眾人齊聲應道：「收到！」
江河洗完手，雙手揣兜，離開實驗室，帥得沒話說。
在他腦海里，其實有一個非常明確的進度條。
【miRNA胰腺癌早篩項目進度：25%——————】
提取流程攻克，再漲十個百分點。
【miRNA胰腺癌早篩項目進度：35%————】
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